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Agilent甲基化芯片通过SurePrint芯片合成**技术,结合优化的探针设计及实验方法,可灵活进行甲基化研究,得到高灵敏度、高特异性、高重复性的结果。技术流程:1.将基因组DNA超声打断成400-500bpDN**段;2.加热变性并将变性后的单链DNA样品分成两份;3.其中一份单链DNA样品加入抗5'-甲基化胞嘧啶核苷抗体。使用免疫磁珠法分离样品中甲基化DN**段的抗体复合物,样品中其余的非甲基化DN**段被洗脱;4.纯化免疫共沉淀的DN**段;对MeDIP(Cy5)与Input(Cy3)样品分别进行标记;5.标记后的MeDIP与Input样品混合、变性,与芯片杂交;6.检测杂交信号并进行数据分析。芯片种类:Agilent**甲基化芯片,8x60K●和合作伙伴在Agilent公司定制的Promoter芯片。●绝大多数基因是针对基因启动子区域的CpG岛设计探针。●芯片上一共有4160个功能注释比较明确的基因,其中2128个和**发生有关系。●从功能上分,有256基因和细胞凋亡有关,1273个基因和信号传导有关,487个基因和压力和衰老有关。●特别适用于**甲基化研究。 高通量BSP测序结果多种展示形式。重庆850K芯片技术服务服务
industryTemplate四川单细胞测序技术服务方案焦磷酸测序能提供杂合子缺失及细菌和病毒分型等技术服务。
GOS2基因靶向甲基化测序确定了一种快速复发、常规致死的肾上腺皮质*亚型
Targeted Assessment of G0S2
Methylation Identifies a Rapidly Recurrent, Routinely Fatal Molecular Subtype
of Adrenocortical Carcinoma. Clin Cancer Res. 2019; 25(11):3276-3288.
(IF= 10.199)
研究者分析了ACC-TCGA数据,在114例肾上腺皮质**的**队列中鉴定了一个在CIMP高ACC中***被高甲基化并沉默的基因G0S2,并通过高通量BSP得到验证。G0S2基因CpG岛高甲基化**预测不良临床后果,是ACC快速复发或致死的标志。评估G0S2甲基化对临床决策是直接可行的,并有助于对侵袭性ACC进行有效辅助***。
WGBS送样要求一、送样类型基因组DNA、细胞、全血、动植物组织、FFPE二、保存方式1、基因组DNA、细胞、全血、动植物组织:放-20℃冰箱中保存,或者放-80℃冰箱中长期保存(1年以内);保存期间避免反复冻融。2、FFPE样本:室温保存三、运输条件1、基因组DNA:冰袋或者干冰运输;2、细胞、全血、组织样本:干冰运输,顺丰陆运(3-4天时间),夏季10-15公斤干冰;秋冬季10公斤干冰;3、FFPE样本:室温运输。四、样本量要求1、基因组DNA:常规WGBS,不少于2ug;微量WGBS,20ng1)提供样本DNA完整性质检结果,例如琼脂糖凝胶电泳或者Agilent2100电泳等;2)提取基因组DNA,要加RNA酶,去除RNA污染;3)提取基因组DNA,溶到TE或者elutionbuffer,避免溶解到纯水;样本体积不超过100ul;4)提供Qubit检测浓度,基于OD值的检测方法,例如NanoDrop,会严重高估浓度。2、细胞样本:常规WGBS,不少于5x10*6个细胞;微量WGBS,5000个细胞1)收集贴壁或者悬浮细胞、使用预冷的1×PBS,洗涤2次,600g离心5分钟;2)***一次离心后,尽量去除上清PBS,保留细胞沉淀;3、全血样本:2-5ml外周血使用普通EDTA抗凝管,避免使用肝素抗凝管。4、动植物组织:动物组织,30mg以上;植物组织,不同组织。 基于高通量测序平台的甲基化图谱分析。
甲基化DNA免疫沉淀测序(MethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing,MeDIP-Seq)是通过5mC特异性抗体富集甲基化的DN**段,然后结合高通量测序技术在全基因组水平上以较小的数据量,快速、高效地寻找甲基化区域。可广泛应用于甲基化与疾病关系研究。技术优势全基因组范围鉴定甲基化修饰区域针对性检测基因组内具有甲基化修饰的区域与WGBS技术相比,成本更低科学方案设计从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序,到数据分析每个项目有特定的科学问题;需要专业、有价值的建议;科学、缜密的设计及时高效的沟通;以保障高质量研究成果样本要求:基因组DNA:>=3ug;样品浓度>50ng/ul;无RNA和蛋白污染建库测序:测序策略:IlluminaHiSeq,PE150。 焦磷酸测序技术是甲基化检测新的金标准。四川ATAC技术服务售后分析
基因组DNA冰袋或者干冰运输。重庆850K芯片技术服务服务
相比之下,VeraCode GoldenGate甲基化分析技术更适合中通量的筛选及验证研究,它以以矩阵微珠芯片(Sentrix Array Matrix(SAM))形式分析48至384个用户指定的CpG位点。首先,将亚硫酸氢盐处理的基因组DNA 与分析oligo混合,oligo与未甲基化位点的U互补,或者与甲基化位点的C互补。杂交之后,引物延伸,并连接上位点特异的oligo来产生通用 PCR的模板。***,用标记的PCR引物生成可检测的产物。据Illumina的产品**介绍,其产品的**优势在于单个CpG位点的分辨率。其它分析将甲基化定位在一段区域,而通过Illumina分析,你能精确测定某个CpG位点的甲基化水平。重庆850K芯片技术服务服务
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