重庆FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白组学

Genovis酶的适应性和更高的通量和自动化工作流程的中级方法，这是非常重要的。 随着分析方法和仪器的改进，在表征实验室中有更大的能力进行更多类型的分析，或者在工艺开发或QC实验室中有更先进的分析仪器。 当涉及到能够支持大量样本分析的活动时，例如克隆筛选，工艺开发和验证以及稳定性研究，这是非常好的。 此外，Genovis产品的效率、健壮性（Robust）和易用性使它们更容易应用于这些类型的工作，而且，也适用于受控环境中的批次放行方法。Genovis的产品很好地支持这种类型的工作，这也促使Genovis不断推出新产品和现有产品的不同形式，以支持客户的工作。FabRICATOR（IdeS蛋白酶） 的高特异性也意味着相同的消化方案可以作为平台方法应用于许多不同的抗体。重庆FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白组学

与IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶，可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1，产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小时内完成，并且由于酶的特异性，如果孵育时间延长，则不存在过度消化的风险。该酶在pH值6.5至8.0下具有活性，不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。活性是在37°C下，但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgASAPSub1是从口腔链球菌克隆而来的，并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签，分子量为148kDa。IgASAPSub1冻干剂以冻干粉的形式提供，装在1000个单位的小瓶中，用于消化1mgIgA1。安徽FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候选物样品复杂性并明显简化IgA分析表征的宝贵工具。

与IdeS不同，Genovis的IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性蛋白酶，可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。该酶能够对复杂和高分子量的人IgM进行中级分析，从而促进疫苗、zhiliao和诊断等过程中的IgM表征。独特-可实现IgM的中级表征和质量控制；快速–在30分钟内生成均匀的F（ab'）2和Fc片段；高度特异性–人IgM重链中的一个消化位点。IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性酶，可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM，产生F（ab'）2和Fc片段。消化在30分钟内完成，并且由于酶的特异性，如果孵育时间延长，则不存在过度消化的风险。该酶在pH值为5.5至9.0时具有活性，不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。良好的活性是在37°C下，但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgMBRAZOR在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签，分子量为38kDa。

一些应用（如结合研究）具有高度灵敏度，因此在制备中需要不含残留酶的纯抗体片段。因此，Genovis的 IgG 特异性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速轻松地生成均质 F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制备来自多种 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（对于兔 IgG，请咨询），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 试剂盒进行处理 。 为了生成和纯化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒处理曲妥珠单抗，并通过 SDS-page 进行分析。首先，在室温下在FabRICATOR固定化离心柱上消化抗体15分钟，然后进行短离心步骤。在 CaptureSelect ™ 离心柱上纯化 F（ab'）2 片段，并通过降低 pH 值，然后立即调整回中性 pH 值，一步洗脱结合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒从酶切到收集片段的过程大约需要 1 小时在铰链正上方的一个特定位点消化人 IgG1，产生完整的 Fab 和 Fc 片段。

与IdeS不同，在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中，详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有柔性连接子的融合蛋白疗法，这包括确认连接蛋白的质量以及蛋白质接头的质量。使用 Genovis的GlySERIAS 的连接子酶切可以通过分离连接的蛋白质结构域来帮助这种质量控制。然而，连接子中的大量甘氨酸残基提供了酶的许多潜在消化位点，导致连接子内多个位点同时水解。消化的产物通常由连接蛋白的几种变体组成，并保留不同程度的连接子。虽然观察到的异质性通常不会对蛋白质亚基的详细表征产生负面影响，但有助于直接表征连接子，但有时需要更均匀的消化产物来详细分析单个蛋白质结构域。例如氧化、糖基化等翻译后修饰，可以用IdeS酶。重庆FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白组学

剩下一个连接子残基（甘氨酸残基），这有助于识别位于Fc区域的修饰。重庆FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白组学

对于携带突变铰链的 Fc 融合蛋白或抗体来说，Fab 和 Fc 片段的生成可能具有挑战性。Genovis的GingisKHAN酶在铰链上方一个可触及的赖氨酸位点消化人IgG1，在足够温和的还原条件下保留链内和链间二硫键，从而产生完整的Fab和Fc片段。对于融合蛋白，消化通常在铰链上方获得，但融合伴侣的结构和氨基酸序列可能导致其他暴露的消化位点。如果去除保守的 Fc N-聚糖，Fc 中的第二个切割位点也可能被GingisKHAN酶切。将精选的单克隆人 IgG1 抗体和 Fc 融合蛋白与 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小时，并通过 HPLC 进行分析。重庆FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白组学